不同分子亚型乳腺癌细胞系中RUNX3蛋白表达及定位研究

目的:检测人类Runt相关转录因子3(RUNX3)在不同分子亚型乳腺癌细胞系中的表达及其亚细胞定位情况,为进一步揭示RUNX3的失活机制和发现新的治疗靶点提供理论依据。方法:在5种乳腺癌细胞(MCF-7、T47D、SKBR-3、MDA-MB-231和BT-549)及正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中,通过Western blot和免疫荧光实验检测RUNX3的蛋白表达和亚细胞定位情况;采用来普霉素B(Leptomycin B)抑制RUNX3的出核,利用CCK-8法检测细胞活力的改变,EdU染色检测细胞增殖情况,Western blot和免疫荧光实验检测RUNX3的蛋白表达和亚细胞定位的改变。结果:与MCF-10A细胞相比,5种乳腺癌细胞系中RUNX3的核定位减少、胞浆定位增多。经Leptomycin B处理后,CCK-8实验结果显示5种乳腺癌细胞的活力明显减弱,EdU染色显示5种乳腺癌细胞增殖能力明显降低,Western blot和免疫荧光实验显示5种乳腺癌细胞胞浆中的RUNX3蛋白表达量明显降低、胞核中的RUNX3蛋白表达量明显增多(P0.05)。结论:不同分子亚型乳腺癌细胞中均存在RUNX3的胞浆转位失活现象,针对性地逆转RUNX3的出核过程可以明显降低肿瘤细胞的活力和增殖能力,可能成为乳腺癌潜在的治疗靶点。     

创伤后应激障碍小鼠海马神经细胞内 FoxO3a和LC3蛋白的表达变化

目的 研究创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)小鼠海马神经细胞内FoxO3a和LC3蛋白表达的变化。方法 采用单一连续刺激(single prolonged stress,SPS)方法建立PTSD小鼠模型,应用旷场实验、高架十字迷宫、Morris水迷宫3种行为学检测方法测试SPS刺激后小鼠的空间记忆能力和焦虑水平,通过Western blot法检测海马神经细胞自噬相关蛋白LC3、p62以及信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a的表达,并利用免疫荧光染色方法观察FoxO3a、LC3的表达水平。结果 行为学实验检测结果显示,与Control组比较,PTSD组小鼠焦虑水平升高及空间记忆受损(P＜0.01);Western blot法和免疫荧光染色结果显示,PTSD组小鼠海马神经细胞p-Akt蛋白水平增加,FoxO3a蛋白表达增加,p-FoxO3a蛋白表达减少,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加,p62蛋白水平降低(P＜0.05);海马神经细胞内FoxO3a和LC3荧光表达强度增加。结论SPS刺激后PTSD小鼠海马神经细胞自噬增多,FoxO3a表达增加。     

细胞因子信号转导抑制分子1在胃癌中的表达及意义

目的 分析细胞因子信号转导抑制分子1（SOCS1）在胃癌组织中的表达及其与患者临床病理参数间的关系,探讨其在胃癌患者预后中的意义。方法 收集67例无术前放射治疗和化学治疗史的胃癌患者的胃癌及癌旁组织标本,建立组织芯片,通过免疫组织化学染色SP法检测组织中SOCS1蛋白的表达情况。采用χ²检验分析SOCS1蛋白表达与患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验分析SOCS1蛋白表达与患者生存的关系,采用Cox比例风险回归模型分析SOCS1蛋白表达与预后的关系。结果 SOCS1蛋白阳性表达率在胃癌组织中为80.6%（54/67）,在癌旁组织中为61.2%（41/67）,两组间差异有统计学意义（P<0.05）。SOCS1蛋白表达阳性患者的淋巴结转移率高于阴性表达患者[74.1%（40/54）vs 38.5（5/13）,P<0.05]。Kaplan-Meier生存分析结果显示,SOCS1蛋白阳性表达患者的总生存率低于阴性表达患者（P<0.05）。Cox比例风险回归模型分析结果显示,SOCS1蛋白表达和肿瘤TNM分期是胃癌患者的独立预后因素。结论 SOCS1蛋白在胃癌中高表达,检测其表达情况有助于临床判断胃癌患者淋巴结转移及预测预后。